Procedure di Identificazione Batterica: Protocolli di Laboratorio e Test Microbiologici

Raccolta dei Campioni Clinici

Naso che cola

La procedura deve essere eseguita nei confronti dei vettori sospettati di Staphylococcus aureus:

• Prendere un tampone sterile e inserirlo nel naso, raggiungendo il nasofaringe.
• Strofinare il setto e il pavimento delle narici.
• Ruotare il tampone delicatamente, lasciare agire per 10-15 secondi e rimuovere.

Secrezione faringea

Il paziente deve essere posizionato comodamente con una buona illuminazione. Chiedere di pronunciare la lettera "A" e, con l'ausilio di un abbassalingua, abbassare la lingua:

• Strofinare il tampone su entrambe le tonsille e sulla parete posteriore della faringe con movimenti rotatori.
• Non toccare la lingua o l'ugola.

Espettorazione

Il paziente deve lavarsi i denti con acqua pura, effettuando risciacqui ripetuti senza utilizzare il dentifricio:

• Raccogliere l'espettorato di prima mattina in un contenitore sterile.
• Il campione deve presentare caratteristiche mucopurulente.

Colorazione di Gram

1. Stendere le colonie in esame su un vetrino pulito, mescolando con soluzione salina sterile per mantenere la preparazione. Fissare delicatamente passando il vetrino sulla fiamma del bruciatore fino all'evaporazione del liquido, evitando il surriscaldamento. Posizionare i vetrini nella vaschetta di colorazione.
2. Coprire il vetrino con cristallo violetto per un minuto.
3. Aggiungere la soluzione di iodio per un minuto.
4. Risciacquare con acqua di rubinetto e decolorare con alcool-acetone.
5. Coprire il vetrino con il colorante fucsina e risciacquare.
6. Lasciare asciugare in posizione inclinata.
7. Osservare al microscopio con obiettivo 100x (immersione).

Nella colorazione di Gram, i batteri devono essere osservati per forma, colore e dimensione del raggruppamento. Una volta sviluppate le colture, osservare le caratteristiche delle colonie per definire genere e specie.

Test Biochimici per l'Identificazione

Test della Catalasi

Enzima che scompone il perossido di idrogeno in ossigeno e acqua. Esclude gli Streptococcus, poiché permette di distinguere i membri della famiglia Micrococcaceae da quelli della famiglia Streptococcaceae.

• Il rapido sviluppo di bolle di gas o effervescenza indica una reazione positiva.
• Il genere Micrococcus dà una reazione positiva, mentre Streptococcus dà una reazione negativa.

Test della Coagulasi

La coagulasi è un enzima capace di convertire il fibrinogeno in fibrina, causando la formazione di un coagulo visibile. Una reazione positiva è dimostrata dalla formazione di un coagulo o gel. Sono positivi i batteri Staphylococcus aureus.

Fermentazione del glucosio

Questo test distingue il genere Micrococcus dal genere Staphylococcus, poiché quest'ultimo fornisce un risultato positivo.

Test di fermentazione del mannitolo 1%

I ceppi di S. aureus, in contrasto con S. epidermidis, possiedono la capacità di fermentare il mannitolo con produzione di acido. Il cambiamento di colore iniziale verso il giallo indica una reazione positiva per acidificazione.

Test della DNasi

Utile per identificare i ceppi di S. aureus, che producono l'enzima DNasi capace di idrolizzare il DNA. Il terreno subirà un cambiamento di colore intorno alla colonia, indicando l'idrolisi del DNA.

Famiglia Streptococcaceae

I cocchi gram-positivi si raggruppano in coppie o catene. Nei terreni di coltura solidi formano piccole colonie traslucide.

Categorie di importanza clinica

I generi possono essere classificati in base alle loro proprietà immunologiche, emolitiche e biochimiche. Su agar sangue è necessario determinare le caratteristiche emolitiche.

Proprietà emolitiche

Il tipo di emolisi prodotta su agar sangue è fondamentale per l'identificazione di Streptococcus. I terreni utilizzati devono essere privi di zuccheri. L'incubazione in atmosfera di CO2 può inibire la produzione di emolisi.

Classificazione in base al tipo di emolisi:

• Alfa-emolisi: alterazione parziale dell'emoglobina o metaemoglobina.
• Beta-emolisi: emolisi totale dei globuli rossi con l'azione di emolisine (Streptolisine S e O).
• Gamma-emolisi: assenza di emolisi.

Proprietà biochimiche

Classificazione basata sulle reazioni biochimiche per distinguere le specie:

• Streptococcus pyogenes
• Streptococcus viridans
• Streptococcus pneumoniae